RESUMO Objetivou-se com este trabalho otimizar a produção de enzimas celulolíticas por hps C. gloeosporioideshps URM 7080 isolado de lesões foliares de Manihot esculenta, sintomáticas de Antracnose. Utilizou-se farelo de entrecasca de mandioca (MA) e palma forrageira triturada (PA) como substratos para fermentação submersa nas concentrações 0,5, 0,75 e 1%, pH inicial 5,0, 6,0 e 7,0; agitações 80, 110 e 140 rpm e temperaturas de 28, 32 e 36 °C em experimento fatorial fracionário 25 com 32 ensaios + 4 repetições no ponto central. Os melhores parâmetros para produção de cada enzima isolada foram: 1% de MA, 0,5% de PA, 28° C, com o pH inicial 5,0 para FPAse (Celulase total) e pH 7,0 para CMCase (Endoglucanase); Para βG (β-glucosidase), pH inicial 5,0 à 36° C, e concentração de 0,5 de PA e agitação de 140 rpm para as três enzimas em conjunto.

ABSTRACT The aim of the present study was to optimize the production of cellulolytic enzymes by C. gloeosporioides URM 7080 isolated from leaf lesions in Manihot esculenta showing symptoms of anthracnose. Cassava bran (MA) and crushed forage cactus (PA) were used as substrates for submerged fermentation at the concentrations of 0.5%, 0.75% and 1%; initial pH of 5.0, 6.0 and 7.0; agitation at 80, 110 and 140 rpm, and temperatures of 28, 32 and 36°C, in a 25 fractional factorial experiment with 32 trials + 4 replicates at the central point. The best parameters for the production of each isolated enzyme were: 1% MA, 0.5% PA, 28°C, and initial pH of 5.0 for FPase (total cellulase) and pH of 7.0 for CMCase (endoglucanase); initial pH of 5.0 at 36°C for βG (β-glucosidase), and concentration of 0.5% PA at 140 rpm for the three enzymes together.

RESUMO Austropuccinia psidii é o agente etiológico de uma das principais doenças do jambeiro-do-pará: a ferrugem-amarela. Em uma ocorrência dessa doença foi constatada a ação de um fungo hiperparasito sobre uredossoro de A. psidii. A partir de folhas lesionadas, dois isolados de Fusarium foram caracterizados por análise morfológica e molecular. Os resultados revelaram que esses organismos pertencem a dois complexos de espécies: Fusarium fujikuroi (FFSC) e Fusarium solani (FSSC). A ocorrência desses fungos micoparasitas é uma forma de controle biológico natural para esta ferrugem e o seu estudo contribuirá para o manejo da ferrugem amarela.

ABSTRACT Austropuccinia psidii is the etiologic agent of one of the major diseases affecting “jambeiro-do-pará”: yellow rust. During the incidence of yellow rust, the action of a hyperparasitc fungus on uredosore of A. psidii was observed. From injured leaves, two Fusarium isolates were characterized based on morphological and molecular analysis. Results evidenced that these organisms belong to two species complexes: Fusarium fujikuroi (FFSC) and Fusarium solani (FSSC). Occurrence of these mycoparasite fungi is a form of natural biological control for this rust and the study of these fungi will contribute to the management of yellow rust.

Abstract Aspergillus fumigatus is an opportunistic saprobe fungus that accounts for 90% of cases of pulmonary aspergillosis in immunosuppressed patients and is known for its angiotropism. When it reaches the respiratory tract, A. fumigatus interacts with structural components and blood vessels of the lungs, such as elastin. To understand the effect of this structural component, we examined the effect of elastin on the production and development of the biofilm of A. fumigatus. In RPMI containing 10 mg/mL of elastin, a significant increase (absorbance p < 0.0001; dry weight p < 0.0001) in the production of biofilm was observed in comparison to when RPMI was used alone, reaching a maximum growth of 18.8 mg (dry weight) of biofilm in 72 h. In addition, elastin stimulates the production (p = 0.0042) of extracellular matrix (ECM) and decreases (p = 0.005) the hydrophobicity during the development of the biofilm. These results suggest that elastin plays an important role in the growth of A. fumigatus and that it participates in the formation of thick biofilm.

RESUMO A partir de coletas realizadas em plantios comerciais de mandioca (Manihot esculenta Crantz) em 11 municípios do Estado da Paraíba, obtiveram-se 27 isolados dos fungos Colletotrichum gloeosporoides f. sp. manihotis Henn (Penn.) e Fusarium oxysporum Schlent, fitopatogênicos à cultura. Desses isolados foi obtida a produção enzimática do complexo celulolítico, sob fermentação submersa à 120 rpm e 30 °C durante 7 dias, tendo CMC (Carboximetilcelulose) como fonte de carbono. As atividades enzimáticas foram quantificadas por meio do grau de hidrólise de tiras de papel de filtro (FPAse) e de CMC (CMCase). Utilizou-se a liberação de Paranitrofenol para quantificação das atividades da β-glucosidase (βG). As atividades mais elevadas observadas foram: 23,13 e 1,51 U/ml para FPAse e CMCase pelos isolados de C. gloeosporioides URM 7124 e 7125. Para βG, 0,0014 U/mL, pelo isolado 13.

ABSTRACT Material collected from commercial crops of cassava (Manihot esculenta Crantz) in 11 municipalities in the state of Paraíba included 27 isolates of the fungi Colletotrichum gloeosporoides f. sp. manihotis Henn (Penn.) and Fusarium oxysporum Schlent., which are pathogenic to the culture. From these isolates, cellulolytic enzyme complex production was obtained under submerged fermentation at 120 rpm and 30 °C for 7 days, with CMC (Carboxymethyl Cellulose) as carbon source. Enzyme activities were quantified by means of the degree of hydrolysis of strips of filter paper (FPAse) and CMC (CMCase). The release of Paranitrofenol was used to quantify the activities of β-glucosidase (βG). The highest activities were: 23.13 and 1.51 U/ml for FPase and CMCase by the isolates of C. gloeosporioides URM 7124 and 7125. For βG, 0.0014 U/ml by isolate 13.

A mandioca é utilizada na alimentação humana, animal e na indústria. No Estado da Paraíba, é explorada comercialmente no Litoral, na microrregião do Brejo Paraibano e como cultura de subsistência no interior. Tendo em vista a ausência de estudos epidemiológicos da cultura no Estado, objetivou-se com este trabalho avaliar o progresso da severidade e da incidência da mancha parda (Cercosporidium henningsii), mancha branca (Phaeoramularia manihotis) e antracnose (Colletotrichum gloeosporioides) em condições de infecção natural em campo ao longo de um ano, no Sítio Geraldo, situado no município de Alagoa Nova-PB, Brejo paraibano. Os dados para os estudos epidemiológicos foram registrados no 18º dia de cada mês, no período de setembro de 2012 a agosto de 2013. Para avaliar a incidência, calculou-se a porcentagem de plantas apresentando sintomas. A severidade foi quantificada a partir das observações das lesões nos tecidos foliares com o emprego de escala diagramática, escala descritiva e índice de Índice de Mackinney. Os dados da curva de progresso foram submetidos à análise de correlação de Pearson em relação aos dados meteorológicos mensais. Calculou-se também a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). Dentre as plantas selecionadas 95%, 17% e 8,5% apresentaram os sintomas de mancha parda, mancha branca e antracnose, respectivamente. As lesões destas doenças foram observadas na ordem de 13,3%; 4,7% e 3,3% de extensão nos tecidos aéreos. Os valores de incidência e severidade das três doenças aumentaram gradativamente no decorrer do período de avaliação, atingindo o resultado final de 61,02; 32,45 e 15,28 para AACPD. As taxas de progresso da severidade mensais mais elevadas foram de 0,441 para mancha parda em setembro, 0,197 para mancha branca e 0,192 para antracnose, em novembro e dezembro. Houve correlação positiva entre o índice pluviométrico e o progresso das doenças e negativa em relação à diminuição das temperaturas médias mensais para as três enfermidades.

The cassava is used in human and animal food, as well as in the industry. In the state of Paraíba, it is commercially explored on the Coast, in the microregion of "Brejo Paraibano" and as subsistence crop in inner regions of the state. In view of the lack of epidemiological studies of this crop in Paraiba State, the aim of this study was to evaluate the severity progress and the incidence of brown leaf spot (Cercosporidium henningsii), anthracnose (Colletotrichum gloeosporioides) and white leaf spot (Phaeoramularia manihotis) under conditions of natural infection in the field over one year at the small farm Geraldo, in the city of Alagoa Nova-PB, "Brejo Paraibano". The data used for the epidemiological studies were recorded on the 18th day of every month, from September 2012 t oAugust 2013. Toassess the incidence, the percentage of plant sex hibiting symptoms was calculated. Disease severity was quantified based on observations of lesions in leaf tissues by using a diagrammatic scale, descriptive scale and the Mackinneyindex. The disease progresscurve data were subjected to Pearson correlation analysis relative to the monthly meteorological data. The area under the disease progresscurve (AUDPC) was also calculated. Of the selected plants, 95%, 17% and 8.5% showed symptoms of brown leaf spot, white leaf spot and anthracnose, respectively. The lesions of these diseases were observed in the order of 13.3%, 4.7% and 3.3% of extension in shoot tissues. The values of incidence and severity of the three diseases gradually increased over the evaluation period, reaching the final results of 61.02, 32.45 and 15.28 for AUDPC. The highest monthlyrates of severity progress were 0.441 for brown leaf spotin September, 0.197 for white leaf spotand 0.192 for anthracnose in November and December. There was a positive correlation between the pluviometric indexand the disease progressand a negative correlation for the decline in the monthly average temperatures for the three diseases.

O controle microbiano consiste na utilização racional de patógenos, visando à manutenção da população de insetos em equilíbrio no ambiente. Metarhizium anisopliae é a espécie mais estudada e utilizada no controle biológico de insetos. A variabilidade genética dos fungos entomopatogênicos pode ser considerada uma das principais vantagens no controle microbiano de insetos e pode ser detectada por meio de marcadores moleculares, como ITS-RFLP, ISSR e ISSP. Esses marcadores são usados para a caracterização inter e intraespecífica de Metarhizium e outros fungos entomopatogênicos e poderão auxiliar na compreensão da diversidade genética e da estrutura das populações destes fungos. A persistência de M. anisopliae no solo e seu possível efeito na estrutura da comunidade microbiana deste solo são características importantes e pouco estudadas, que devem ser consideradas no processo de seleção de isolados para o controle biológico de insetos.

Microbial control of insects is based on the rational use of pathogens to maintain environmentally balanced pest population levels, and Metarhizium anisopliae has been the most studied and most utilized fungal species for that purpose. The natural genetic variability of entomopathogenic fungi is considered one of the principal advantages of microbial insect control. The inter- and intraspecific variability and the genetic diversity and population structures of Metarhizium and other entomopathogenic fungi have been examined using ITS-RFLP, ISSR, and ISSP molecular markers. The persistence of M. anisopliae in the soil and its possible effects on the structures of resident microbial communities must be considered when selecting isolates for biological insect control.

Objetivando-se levantar e quantificar a incidência de doenças da mandioca em plantios comerciais no Estado da Paraíba, realizaram-se coletas em 21 municípios de quatro microrregiões do Estado no primeiro semestre de 2011. As doenças detectadas foram mancha parda (Cercosporidium henningsii), mancha branca (Phaeoramularia manihotis), antracnose (Colletotrichum gloeosporioides f. sp. manihotis) e podridão mole (Fusarium oxysporum). A incidência apresentou-se com variação, sendo os maiores índices constatados nos municípios das microrregiões do Curimataú Ocidental, Sapé e Brejo paraibano. A mancha parda ocorreu em todos os municípios avaliados, sendo seguida da mancha branca, cuja porcentagem de plantas atacadas foi inferior. A antracnose foi detectada em cerca de 70% dos municípios avaliados, porém com incidência reduzida. A maior incidência da podridão causada por F. oxysporum foi observada na cidade de Imaculada, microrregião de Serra do Teixeira.

To survey and quantify the incidence of the diseases affecting cassava (Manihot esculenta) in commercial crops of the state of Paraiba - Brazil, samplings were conducted in 21 municipalities at four microregions of the state during the first semester of 2011. The detected diseases were brown leaf spot (Cercosporidium henningsii), white leaf spot (Phaeoramularia manihotis), anthracnose (Colletotrichum gloeosporioides f. sp. manihotis) and root rot (Fusarium oxysporum). The incidence varied, and the highest indexes were found for the municipalities of the microregions of Curimataú Ocidental, Sapé and Brejo Paraibano. Brown leaf spot occurred in all evaluated municipalities, followed by white leaf spot, which showed inferior percentage of affected plants. Anthracnose was detected for around 70% of the evaluated municipalities but had reduced incidence. The highest incidence of root rot caused by F. oxysporum was observed for the city Imaculada, microregion of the Serra do Teixeira.

In order to assess the effectiveness of Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Metschnikoff) Sorokin isolates in controlling the sugarcane root spittlebug Mahanarva fimbriolata (Stal) (Hemiptera: Cercopidae), nine isolates obtained from a single geographical region were studied. 'Confirmed cumulative' and 'corrected cumulative' spittlebug mortality rates were measured for each of the isolates. Based on the confirmed mortality curve, the isolates URM5946, URM5951 and URM6033 were considered to be potentially the most effective in a biological control program for M. fimbriolata.

Estudos foram realizados para analisar a caracterização genética usando marcadores de RFLP-ITS e ISSP e a amplicação do gene de patogenicidade cap20 por PCR em isolados de Colletotrichum gloeosporioides de diferentes hospedeiros. Primers para o gene cap20 foram construídos a partir de seqüências selecionadas do GenBank (National Center of Biotechnology Information, http://www.ncbi.nlm.nih.gov) com o programa Primer 3. A análise dos dendrogramas revelou que o marcador RFLP-ITS foi mais informativo em separar as espécies de Colletotrichum, e que o primer EI1 evidenciou maior diversidade genética. A amplificação do DNA dos isolados de Colletotrichum para o gene cap20 com os primers P1 e P2 indicou que este gene pode apresentar variações dentro de C. gloeosporioides relacionada ao hospedeiro, e que também está presente em outras espécies de Colletotrichum.

Studies were performed to analyze the genetic characterization using RFLP-ITS and Intron (primer EI1) markers and the amplification of the cap20 pathogenicity gene by PCR in Colletotrichum gloeosporioides isolates of different hosts plant. The genetic variability was accessed using RFLP-ITS and Intron markers and grouping by UPGMA method. Primers to cap20 gene were constructed using selected sequences of the GenBank (National Center of Biotechnology Information, http://www.ncbi.nlm.nih.gov) with the Primer 3 program. The dendrograms analysis showed that the RFLP-ITS marker was more informative to separate the Colletotrichum sp, and that primer EI1 demonstrated greater genetic diversity. The amplification of the DNA of the Colletotrichum isolates to the cap20 gene with primers P1 and P2 indicated that this gene could present variations into C. gloeosporioides related with the host, and also that it was present in other Colletotrichum sp.

Quatro isolados de Sclerotinia sclerotiorum, foram testados quanto à patogenicidade em plantas de feijão, variedade IPA-10 sendo que todos se mostraram patogênicos. Foram avaliados o controle biológico e químico in vitro, utilizando-se oito isolados de Trichoderma e um de Ulocladium atrum, e o controle químico in vitro, com os fungicidas Tiofanato metílico, Iprodione e Carbendazim. Com exceção de U. atrum todos os isolados dos antagonistas mostraram potencial antagônico contra S. sclerotiorum, destacando-se o isolado 3601 como o de melhor desempenho. No controle químico, Tiofanato metílico foi o mais eficiente, sendo este fungicida e o isolado 3601 comparados in vivo em casa-de-vegetação. Foram observadas diferenças estatísticas entre os tratamentos, sendo que a aplicação do fungicida e do antagonista antes da introdução do patógeno foi mais eficiente, com redução do percentual de incidência em 32,94% e 37,04%, respectivamente.

Four isolates of Sclerotinia sclerotiorum were tested for pathogenicity in IPA-10 variety bean plants (Phaseolus vulgaris L.), and all were pathogenic. Biological control in vitro was evaluated using eight isolates of Trichoderma spp. and, one of Ulocladium atrum. Chemical control in vitro with fungicides Thiophanate methyl, Iprodione and Carbendazim was also tested. Except U. atrum, all Trichoderma isolates showed antagonistic potential against S. sclerotiorum, where isolate 3601 presented the best performance. Thiophanate methyl chemical control was the most efficient. This fungicide and isolate 3601were compared in vivo in greenhouse. There was statistical difference between the treatments, and the application of fungicide and antagonist before the pathogen was the most efficient approach, reducing the percentage of pathogenicity to 32.94% and 37.04%, respectively.

O fungo Fusarium solani (teleomorfo Haematonectria haematococca) apresenta uma expressiva importância na agricultura por ser considerado patógeno para várias culturas de interesse econômico causando doença conhecida por podridão das raízes, além de ser patógeno aos animais e ao homem, provocando nestes últimos, micoses superficiais e sistêmicas. A complexidade associada a sua identificação correta através de métodos tradicionais justifica os esforços de usar marcadores moleculares para caracterização dos isolados. Neste trabalho, três métodos baseados na tecnologia da PCR (um por ribotipagem por PCR e dois por impressão genética por PCR) foram utilizados para investigar a variabilidade molecular de dezoito isolados de F. solani de quatro Estados brasileiros, coletados de diferentes substratos. A análise genética revelou a variabilidade intraespecífica dos isolados de F. solani, sem qualquer correlação para a origem geográfica e substrato. Seu polimorfismo foi observado até mesmo na seqüência conservada do locus do rDNA, e o marcador SPAR (GTG)5 mostrou o mais alto polimorfismo. Em conjunto, estes resultados poderão auxiliar nos estudos da relação entre variabilidade do perfil genético de isolados e os fenótipos de resistência de determinados cultivares às doenças provocadas pelo fungo, orientando programas de melhoramento vegetal.

Fusarium solani fungus (teleomorph Haematonectria haematococca) is of relevance for agriculture, producing a disease that causes significant losses for many cultivars. Moreover, F. solani is an opportunistic pathogen to animals and humans. The complexity associated to its correct identification by traditional methods justifies the efforts of using molecular markers for isolates characterization. In this work, three PCR-based methods (one PCR-ribotyping and two PCR-fingerprinting) were used to investigate the molecular variability of eighteen F. solani isolates from four Brazilian States, collected from different substrates. Genetic analysis revealed the intraspecific variability within the F. solani isolates, without any correlation to their geographical origin and substrate. Its polymorphism was observed even in the very conserved sequence of rDNA locus, and the SPAR marker (GTG)5 showed the highest polymorphism. Together, those results may contribute to understand the relation between fungal genetic variability and cultivars resistance phenotypes to fungal-caused diseases, helping plant-breeding programs.

Neste trabalho foram estudadas as atividades de endoglucanase, exocelobiohidrolase e celobiase em uma linhagem de Lentinula edodes (Berk.) Pegl. cultivada em meio líquido contendo carboximetilcelulose (CMC) ou celulose microcristalina (Avicel). Foram detectadas as atividades de endoglucanase e exocelobiohidrolase no sobrenadante das culturas crescidas tanto em meios contendo CMC como nos meios contendo Avicel, sendo observada a influência da concentração e do tipo de celulose. Não foi detectada atividade de celobiase nos sobrenadantes, sendo a mesma detectada somente no extrato micelial. Com uma concentração de 1,7% de Avicel, a linhagem estudada não demonstrou atividade de exocelobiohidrolase. Porém, à concentração de 0,5% obteve-se uma atividade de 74 µmol de RBBR/mg de proteína/min. Com a substituição de Avicel por CMC a 0,5%, a atividade de exocelobiohidrolase foi reduzida a menos de 50%. A máxima atividade de endoglucanase em sobrenadantes obtidos em meio com Avicel a 0,5% foi em torno de 800 UI/mg de proteína, após 96 horas de cultivo. Em sobrenadantes obtidos de meio com CMC, a atividade desta enzima foi de apenas 200 UI/mg de proteína.

Endoglucanase and exocellobiohydrolase produced b Lentinula edodes (Berk.) Pegl. strain thatt was cultivated in carboxymetilcellulose (CMC) or microcrystalline cellulose (Avicel) liquid media. The concentration and type of cellulose influenced the enzyme activity and production. Extra-cellular cellobiase activity was not detected in CMC or Avicel media. This enzyme was detected in mycelial extracts only. With 1.7% Avicel liquid medium, the strain did not produce exocellobiohydrolase, but 74 µmol RBBR/mg protein/min was detected with 0.5% Avicel. The substitution of Avicel by 0.5% CMC reduced this activity. Endoglucanase also had maximum activity in 0.5% Avicel medium (approximately 820 UI/mg protein) after 96 h incubation. In supernatants from 0.5% CMC, the maximum activity attained was 200 UI/mg protein only.

A técnica de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) foi utilizada para examinar a variabilidade genética em quatorze isolados de Trichoderma além de sua capacidade de antagonizar o fungo fitopatogênico Rhizoctonia solani usando pareamento in vitro, e a possível relação entre perfís de RAPD e agressividade dos isolados de Trichoderma a R. solani. Foram selecionados sete primers para os ensaios de RAPD, os quais produziram 197 bandas. Os dados foram introduzidos no programa de computador NTSYS (Numerical Taxonomy System, Applied Biostatistics)na forma de uma matrix binária, sendo construída uma matriz de similaridade utilizando-se o coeficiente de similaridade de DICE (SD) e baseado nos valores SD, pelo método de agrupamento UPGMA um dendrograma. Observou-se que o grau de similaridade das amostras que apresentaram melhor desempenho antagônico foi bastante baixo, em torno de 40%. Os resultados demonstraram que a variabilidade entre os isolados de Trichoderma é muito alta. Aparentemente não foi demonstrada nenhuma relação entre o perfil de RAPD obtido e o nível de antagonismo dos isolados de Trichoderma nem agrupamento em função da origem dos isolados ou substrato.

Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) procedure was used to examine the genetic variability among fourteen isolates of Trichoderma and their ability to antagonize Rhizoctonia solani using a dual-culture assay for correlation among RAPD products and their hardness to R. solani. Seven oligodeoxynucleotide primers were selected for the RAPD assays which resulted in 197 bands for 14 isolates of Trichoderma. The data were entered into a binary matrix and a similarity matrix was constructed using DICE similarity (SD) index. A UPGMA cluster based on SD values was generated using NTSYS (Numerical Taxonomy System, Applied Biostatistics) computer program. A mean coefficient of similarity obtained for pairwise comparisons among the most antagonics isolates was around 40%. The results presented here showed that the variability among the isolates of Trichoderma was very high. No relationship was found between the polymorphism showed by the isolates and their hardness, origin and substrata.

Foram analisados cinco mutantes MaE (MaE10, MaE27, MaE34, MaE41 e MaE49) da linhagem selvagem E9 de Metarhizium anisopliae var. anisopliae quanto ao perfil de DNA pela técnica de RAPD e também quanto ao conteúdo de proteína total por espectrometria e eletroforese em gel de poliacrilamida e densitometria. O padrão de marcadores de RAPD evidenciou polimorfismo nas amostras; dos 20 primers testados foram selecionados 7 que geraram 113 bandas. Deste total, 47 estavam presentes em todas as amostras (41.6% de bandas monomórficas) e 66 mostraram polimorfismo (58.4%). O coeficiente médio de similaridade foi de 75%. O conteúdo de proteína total variou de 6 a 8 µg/µl. O zimograma e perfís das frações de proteínas obtidos por densitometria revelaram 7 bandas para a linhagem selvagem E9 e 5 bandas para os mutantes com variações nos percentuais em µg% entre as frações de proteínas. A técnica de RAPD mostrou-se bastante sensível para detectar diferenças entre a linhagem selvagem e os mutantes obtidos por radiação gama. A análise de proteína total também evidenciou mudanças ocorridas na quantidade e no padrão de bandas nos mutantes em relação à linhagem selvagem.

Five mutants (MaE10, MaE27, MaE24, MaE41 e MaE49) of Metarhizium anisopliae wild strain E9 were analysed for DNA profile through the RAPD technique and for changes in total protein content by spectrophotometry, polyacrylamide gel electrophoresis and densitometry. The pattern of RAPD markers showed genetic polymorphism among the strains: out of twenty primers seven were selected, producing 113 bands. Forty seven bands were present in all strains (41.6% of monomorphic bands) and 66 showed polymorphism (58.4%). The mean coefficient of similarity among all strains was 0.75 (75%). The total protein content varied, staining in the interval of 6.0-8.0 µg/µl. The electrophoresis analysis, through zymogram and protein fraction profiles by densitometry, allowed the observation of seven bands for the wild strain E9 and five bands for the mutants MaE10, MaE27, MaE34, MaE41 and MaE49, evidence of variations in µg% among protein fractions. The RAPD technique was very sensitive to detect genetic differences between the wild type and the mutants obtained through gamma radiation. The total protein analysis also showed changes in quantity and pattern of bands after electrophoresis in the mutants compared to the wild type.

Eight inoculation methods were studied to evaluate the pathogenicity among six isolates of Colletotrichum gloeosporioides, agent of anthracnose on passion fruits (Passiflora edulis). The isolates were selected by micelial growth and sporulation. The inoculations were made through suspension (1x10(6) conidia/ml) and micelial-agar discs (4mm in diameter). After 6 days of inoculation, the diameter of necrotic area was measure on the fruit epiderm. The most efficient inoculation method was the micelial-agar disc on the fruit wounded epiderm. All isolates caused necrosis by this method, but it showed low efficiency using intact epiderm, where only one isolate was active. One isolate from stem showed greater pathogenicity than the others, and the necrosis in the area was ten times larger than the less pathogenic isolates. The results showed that more than two inoculation methods must be used for the isolate evaluation.